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Qualitativer Nachweis von sulfitreduzierenden, sporenbildenden Anaerobiern in Mineral-, Quell-, Tafelwasser und in sonstigem zur Abgabe an den Verbraucher abgefülltem Trinkwasser mittels Membranfiltration und Einlegen des Filters in einfach konzentrierte Dextrose-Eisencitrat-Natriumsulfit-Bouillon (DRCM-Bouillon).

Anmerkung 1: Sollen nur die Sporen sulfitreduzierender Anaerobier untersucht werden, muss das vorgeschriebene Probenvolumen für die Dauer von 10 Minuten bei 75 °C ± 1 °C erhitzt werden, um die vegetativen Zellen zu inaktivieren. Danach rasch mit kaltem Wasser abkühlen.

Wichtig: Vergleichsuntersuchung mit gleichem Volumen Leitungswasser durchführen, um die erforderliche Gesamterhitzungszeitzeit im Wasserbad zu ermitteln.

Qualitativer Nachweis von sulfitreduzierenden, sporenbildenden Anaerobiern in Mineral-, Quell-, Tafelwasser und in sonstigem, zur Abgabe an den Verbraucher abgefülltem Trinkwasser mittels Membranfiltration und Auflegen des Filters auf festem Nährmedium.

Anmerkung 1: Sollen nur die Sporen sulfitreduzierender Anaerobier untersucht werden, muss das vorgeschriebene Probenvolumen für die Dauer von 10 Minuten bei 75 °C ± 1 °C erhitzt werden, um die vegetativen Zellen zu inaktivieren. Danach rasch mit kaltem Wasser abkühlen.

Wichtig: Vergleichsuntersuchung mit gleichem Volumen Leitungswasser durchführen, um die erforderliche Gesamterhitzungszeitzeit im Wasserbad zu ermitteln.

Membranfiltration (MF) und Auflegen des Filters auf Dextrose-Eisensulfat-Natriumsulfit-Agar (DRCM-Agar) (entspricht der Methode Anlage 2, Pkt. 4 a zu § 4 Abs. 3 der deutschen Mineral- und Tafelwasserverordnung, MTV) [1].

Gesamt-Schwefeldioxid (gebundenes und freies) im Bier wird durch Zugabe von Säure und anschließendes Erhitzen freigesetzt, mit Hilfe eines Stickstoffstromes in einen mit Wasserstoffperoxid beschickten Rezipienten überführt und die gebildete Schwefelsäure mit Natronlauge titriert.

Sulfit (schweflige Säure) wird in Gegenwart von Sauerstoff durch Sulfit-Oxidase (SO₂-OD) zu Sulfat oxidiert.

Das bei dieser Reaktion entstehende Wasserstoffperoxid wird in Gegenwart von reduziertem Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid (NADH) durch das Enzym NADH-Peroxidase (NADH-POD) reduziert.

Die in der Reaktion verbrauchte NADH-Menge ist der Sulfitmenge - auch der chemisch an Aldehyd gebundenen Sulfitmenge - äquivalent. NADH ist Messgröße und wird aufgrund seiner Absorption bei 340 nm bestimmt.

SO₂ liegt im Bier oder Wein hauptsächlich gebunden vor (meist an Aldehyde, Ketone und Zucker). Durch die Zugabe von ca. 2 mol/l Schwefelsäure und anschließendes Erhitzen auf 95 °C wird Schwefeldioxid freigesetzt. Das Prinzip basiert darauf, dass im sauren pH-Bereich aus den Carbonyl-Sulfit-Addukten vermehrt SO₂ · H₂O gebildet wird, welches nicht mehr als wirksames Nukleophil fungieren kann. Durch anschließendes Erhitzen nimmt die Löslichkeit von Gasen ab und das gasförmige SO₂ diffundiert durch eine Teflonmembran, wobei es in eine 1%ige Schwefelsäure dialysiert wird. Danach reagiert es mit Formaldehyd zu einem Carbonyl-Sulfit-Addukt (HO-CH₂-SO₃H). Dieses Addukt verbindet sich bei einer Temperatur von 45 °C mit para-Rosanilin zu einem roten Komplex, dessen Absorption bei 560 nm mit einem UV-VIS-Detektor gemessen wird. Bei der Durchführung ist darauf zu achten, dass die angegebenen Teflonmembranen eingesetzt werden, da sonst vorhandene Maillardreaktionsprodukte Blindwerte verursachen können.

Mittels lonenchromatographie an einem Ionenaustauscher kann Sulfit neben anderen Ionen bestimmt werden.