Suche: Pyridoxin

Der VitaFast® Vitamin B₆ (Pyridoxin) Mikrotiterplattentest ist ein mikrobiologisches Verfahren zur Bestimmung des Gesamtgehaltes an Vitamin B₆ in Lebensmitteln und Getränken.
Vitamin B₆ wird als Pyridoxinhydrochlorid oder als Pyridoxin-5-phosphat zugesetzt. Da die phosphorylierte Vitamin-B₆-Form vom Testkeim nicht erkannt wird, wird das Getränk zur Bestimmung des zugesetzten Vitamin B₆ mit saurer Phosphatase behandelt, anschließend heiß extrahiert und falls erforderlich mit sterilem Wasser aus dem Testkit verdünnt.
Zur Bestimmung des Gesamtgehaltes an Vitamin B₆ (natürliches und zugesetztes) muss die Probe durch eine enzymatische Hydrolyse aufgeschlossen werden.

Das Vitamin-B₆-Assay-Medium und der verdünnte Extrakt werden in die Kavitäten einer Mikrotiterplatte gegeben, die mit Saccharomyces cerevisiae beschichtet sind. Saccharomyces cerevisiae ist auf die Anwesenheit von Vitamin B₆ angewiesen. Nach Zugabe von Vitamin B₆ als Standard oder als in einer Probe enthaltenes Vitamin wächst der Keim solange, bis das Vitamin aufgebraucht ist. Die Inkubation erfolgt bei 30 °C für 44‑48 h.
Das Wachstum von Saccharomyces cerevisiae in Abhängigkeit vom Vitamin B₆ wird als Trübung gemessen und mit einer Standardkonzentrationsreihe verglichen. Die Messung erfolgt im Mikrotiterplattenphotometer bei 610‑630 nm (alternativ bei 540‑550 nm).

Vitamin B₆ wird mit Ionenpaar‑RP‑HPLC getrennt und über UV-Absorption detektiert. Die Quantifizierung erfolgt über den Vergleich mit externen Standards. Die Identität der Substanzen kann, falls erforderlich, über einen Spektrenvergleich bestätigt werden.